Biosynthèse et activités biologiques de glycoconjugués de mycobacterium tuberculosis

Les espèces pathogènes de mycobactéries produisent une variété de glycoconjugués jouant des rôles importants dans la physiologie et/ou la pathogénicité. Au cours de ces travaux de thèse, l'utilisation de méthodes génétiques nous a permis d'identifier des gènes impliqués dans la biosynthèse de deux glycoconjugués mycobactériens : les dérivés de l'acide p-hydroxybenzoïque (pHBAD) et les lipopolysaccharides de méthylglucose (LPMG). Le rôle de ces glycoconjugués dans la pathogénicité de Mycobacterium tuberculosis a également été exploré. Les pHBAD sont des esters méthyliques de l'acide p-hydroxybenzoïque glycosylés en position para. Ces composés sont structuralement et biosynthétiquement reliés aux substituants glycosidiques des glycolipides phénoliques (PGL). Les PGL comme les pHBAD sont restreints à quelques espèces pathogènes de mycobactéries. Les PGL, de localisation pariétale, ont été associés à l'hypervirulence de certains isolais cliniques de M. tuberculosis. Cependant, alors que toutes les souches de M. tuberculosis ne produisent pas de PGL, tous les isolais analysés à ce jour sécrètent des pHBAD dans le milieu. Nous avons démontré que le gène Rv2949c code la chorismate-pyruvate lyase, seule source enzymatique de p-hydroxybenzoate chez M. tuberculosis et première enzyme impliquée dans la synthèse des pHBAD. Ce travail a d'autre part permis de corréler les gènes Rv2958c et Rv2962c à la biosynthèse des pHBAD et de mesurer la contribution de ces molécules à la pathogénicité de M. tuberculosis. Bien que ces composés ne soient pas impliqués dans la multiplication bactérienne lors de l'infection, ils semblent jouer un rôle immunomodulateur, affectant la progression des lésions pulmonaires dans un modèle murin de tuberculose. Une deuxième partie du travail a porté sur la biogenèse des LPMG. Le squelette polysaccharidique de ces molécules est constituéd'environ 20 unités de D-glucose principalement liés en alpha-1,4.11 résidus de glucose de la portion centrale de ce squelette peuvent être 6-O-méthylés. Les enzymes responsables de la biosynthèse des LPMG n'étaient pas connues. Des études génétiques et enzymologiques nous ont permis de mettre en évidence d'une part que le gène Rv3032 de M. tuberculosis code une glucosyltranférase impliquée dans la biosynthèse des LPMG et d'autre part l'existence d'activités glucosyltransférase au moins partiellement redondantes à celle de Rv3032 chez les mycobactéries.PARIS7-Bibliothèque centrale (751132105) / SudocSudocFranceF

Signature-Tagged Transposon Mutagenesis Identifies Novel Mycobacterium tuberculosis Genes Involved in the Parasitism of Human Macrophages

Using signature-tagged transposon mutagenesis, we isolated 23 Mycobacterium tuberculosis mutants, corresponding to 21 genes or genetic regions, attenuated in their ability to parasitize human macrophages. Mutants disrupted in the ABC transporter-encoding genes Rv0986 and Rv0987 were further characterized as being impaired in their ability to bind to host cells